Решение задач «решить 5 задач по генной инжинерии»,
Генная инженерия, медицина в Нижнем Новгороде

1. Рестрикционный фермент BamI разрезает ДНК по последовательности ГГАТЦЦ. Насколько часто этот фермент будет разрезать двухцепочечную ДНК? 2. Перед молекулярными генетиками стояла задача размножить при помощи ПЦР, а также клонировать в плазмиде pUC 18 структурный ген дрозофиллы длиной 1 кб. Ниже приведены только первые и последние 15 нуклеотидов, представляющие соответственно начало и конец данного структурного гена: 5’-АТГГАЦААТЦАГГАГ … … АГАТЦГТТГЦЦТТАА-3’. Какова должна быть последовательность двух праймеров, с помощью которых можно провести амплификацию указанного гена методом ПЦР? Как нужно модифицировать праймеры для того, чтобы после амплификации встроить ген дрозофилы в плазмиду по сайтам Eco RI и Hind III? 3. В плазмиде pUC18 имеется полилинкерный участок, который содержит сайты рестрикции для 10 различных рестриктаз. Можно ли встроить в эту плазмиду приведённые ниже фрагменты двухцепочечной ДНК? 5’-ЦЦГААТТЦАГАТГТААГГЦААТАГТГТГААТТЦАЦА-3’ 3’-ГГЦТТААГТЦТАЦАТТЦЦГТТАТЦАЦАЦТТААГТГТ-5’ 5’-ЦЦТТААГЦТТАГГЦТААГГЦААТАГААГЦТТТЦААТГ-3’ 3’-ГГААТТЦГААТЦЦГАТТЦЦГТТАТЦТТЦГАААГТТАЦ-5’. 4. Исследователи для клонирования важного фрагмента человеческой ДНК величиной 1кб использовали плазмиду pUC18. Трансформированные гибридной плазмидой клетки E. Coli были помещены на питательную среду, содержащую X-Gal. После культивирования в чашках Петри появились колонии синего и белого цвета. Удалось ли встроить нужный фрагмент человеческой ДНК в плазмиду pUC18? 5. Ген для белка ?-тубулина был получен из грибка Neurospora, вставлен в кольцевую плазмиду и клонирован в бактерии E.coli. Опишите шаг за шагом последовательность действий, необходимых для того, чтобы клонировать этот ген от родственного грибка Podospora, используя в качестве вектора кольцевую плазмиду pBR, представленную на рисунке 11, которая несет два гена устойчивости к антибиотикам канамицину (kan) и тетрациклину (tet).